Name: ウェスタンブロッティング (Western Blotting)
Uploaded: 2025-06-14T12:40:45.000Z
Duration: 9 min 57 s
Description: VoiceTubeの動画で発音を聞きながら英語表現を覚えよう！学べる英語：

In this video, you will learn how to perform a western blot.

このビデオでは、ウェスタンブロットの方法を学びます。

上級受動態

A western blot can be used to identify specific proteins in a sample and provide information about the protein size and relative abundance in the sample.

ウェスタンブロットは、サンプル中の特定のタンパク質を同定し、サンプル中のタンパク質のサイズと相対的な存在量に関する情報を提供するために使用することができる。

まずトレイをブロッティングバッファーで満たす。

You will be using this buffer to equilibrate your gel prior to starting the western blot.

ウェスタンブロットを開始する前に、このバッファーでゲルを平衡化する。

Next, remove the gel from the gel cassette using the opening key.

次に、開封キーを使ってゲルをゲルカセットから取り出します。

Line up the arrows on the opening lever with the four arrows on the cassette to open the cassette.

オープニングレバーの矢印とカセットの4つの矢印を合わせ、カセットを開きます。

After trimming the top and bottom of the gel with a straight edge, equilibrate the gel in the tray with blotting buffer for 15 minutes on a rocking platform.

直線エッジでゲルの上部と下部をトリミングした後、ブロッティングバッファーの入ったトレイでゲルをロッキングプラットフォーム上で15分間平衡化する。

Pre-soak fiber pads in blotting buffer so that they are thoroughly soaked.

繊維パッドはあらかじめブロッティングバッファーに浸しておき、十分に浸しておく。

To make a blotting sandwich, obtain a container large enough to fit the gel holder and add enough blotting buffer until the container is filled approximately one centimeter deep.

ブロッティング・サンドイッチを作るには、ゲルホルダーが入る大きさの容器を用意し、容器が約1cmの深さになるまで十分なブロッティング・バッファーを加える。

Place the gel holder cassette in the container with the black side down and immersed in the out of the buffer.

ゲルホルダーカセットを黒い面を下にして容器に入れ、バッファーの外に浸す。

Lay one fiber pad flat on the black plastic.

ファイバーパッド1枚を黒いプラスチックの上に平らに置く。

Next, wet a piece of blotting paper and place it on top of the pad.

次に、あぶらとり紙を濡らしてパッドの上に置く。

Be careful to avoid any bubbles between the pad and the paper and make certain the buffer covers the paper.

パッドと紙の間に気泡が入らないように注意し、バッファーが紙を確実に覆うようにする。

Take the gel and carefully place it squarely onto the blotting paper, again being careful to avoid any bubbles between the gel and the blotting paper.

ジェルとあぶらとり紙の間に気泡が入らないように注意する。

Next you will be applying a piece of nitrocellulose membrane.

次にニトロセルロース膜を貼る。

Remove the protective sheet from the membrane and wet the membrane with blotting buffer.

メンブレンから保護シートを剥がし、ブロッティングバッファーでメンブレンを濡らす。

Carefully place the membrane squarely on the gel.

慎重にメンブレンをゲル上に正対させる。

Avoid moving the membrane once placed on the gel as proteins will begin to blot immediately.

タンパク質がすぐにブロットし始めるので、一度ゲル上に置いたメンブレンを動かさないようにする。

Using a roller, remove any air bubbles between the gel and the membrane.

ローラーを使って、ゲルとメンブレンの間の気泡を取り除く。

Place a second sheet of wet blotting paper on top of the nitrocellulose membrane.

ニトロセルロース膜の上に2枚目の濡れたあぶらとり紙を置く。

Place a second wet fiber pad on top of the blotting paper.

あぶらとり紙の上に2枚目の濡れたファイバーパッドを置く。

Fold the clear plastic side of the gel holder over the sandwich and clamp it to the black plastic side by sliding over the white clip.

ジェルホルダーの透明プラスチック面をサンドイッチの上に折り畳み、白いクリップをスライドさせて黒いプラスチック面に固定する。

This tight fit will squeeze the sandwich together.

このタイトフィットがサンドイッチを圧迫する。

Insert the gel holder into the inner module.

ゲルホルダーをインナーモジュールに挿入する。

Make certain that the black side of the gel holder is next to the black side of the module.

ゲルホルダーの黒い面がモジュールの黒い面の隣にあることを確認します。

Place the inner module into the electrophoresis chamber.

インナーモジュールを電気泳動チャンバーに入れる。

Add a frozen cooling unit and fill the chamber with blotting buffer to the level of the white clip on the gel holder.

凍結冷却ユニットを加え、ゲルホルダーの白いクリップの高さまでブロッティングバッファーを満たす。

Place the lid on the electrophoresis chamber.

Connect the electrical leads to the power supply, making sure the connections are correct, red to red and black to black.

リード線を電源に接続し、赤と赤、黒と黒の接続が正しいことを確認する。

Turn on the power supply and run the blot at 20 volts.

電源を入れ、20ボルトでブロットを作動させる。

If a timer is available, set it for two and a half hours.

タイマーがあれば、2時間半にセットする。

When the run is complete, turn off the power supply and disassemble the electrophoresis chamber and remove the inner module.

ランが完了したら電源を切り、電気泳動チャンバーを分解してインナーモジュールを取り出します。

Open the module and place it in a container filled with blotting buffer with the black side down.

モジュールを開き、黒い面を下にしてブロッティングバッファーの入った容器に入れる。

Starting with the first fiber pad, run the blot at 20 volts.

最初のファイバーパッドから始めて、20ボルトでブロットを走らせる。

Remove each layer until you reach the nitrocellulose membrane.

ニトロセルロース膜に達するまで、各層を取り除く。

As you remove the membrane, note that the proteins have been transferred from the gel to the membrane.

メンブレンを取り除きながら、タンパク質がゲルからメンブレンに移ったことを確認する。

Note that the kaleidoscope pre-stain standards have been transferred and can be seen on both sides of the membrane.

万華鏡のプレステイン・スタンダードが転写され、メンブレンの両面に見られることに注意。

You can also see that there are no longer any proteins on the gel.

ゲル上にタンパク質がなくなったこともわかる。

Immerse the membrane in 25 milliliters of blocking solution and incubate it for 15 minutes at room temperature on a rocking platform.

メンブレンを25ミリリットルのブロッキング溶液に浸し、ロッキングプラットフォーム上で室温で15分間インキュベートする。

一次抗体を10ミリリットル加える。

Incubate for 10 to 20 minutes on a rocking platform.

ロッキングプラットフォーム上で10～20分間インキュベートする。

The platform should be set at a faster setting to ensure constant coverage of the membrane.

メンブレンを常にカバーできるよう、プラットフォームは速めに設定する。

Rinse the membrane quickly in 50 milliliters of wash buffer and then discard the wash buffer.

50ミリリットルの洗浄バッファーでメンブレンを素早くすすぎ、洗浄バッファーは捨てる。

Add another 50 milliliters of wash buffer to the membrane and let it wash for 3 minutes on the rocking platform at a medium speed setting.

さらに50ミリリットルの洗浄バッファーをメンブレンに加え、ロッキングプラットフォーム上で中速の設定で3分間洗浄する。

Add 10 milliliters of secondary antibody and incubate the membrane for 5 to 15 minutes on the rocking platform at a fast speed.

10ミリリットルの二次抗体を加え、高速のロッキングプラットフォーム上で5～15分間メンブレンをインキュベートする。

Rinse the membrane quickly in 50 milliliters of wash buffer and discard the wash buffer.

Add an additional 50 milliliters of wash buffer and wash the membrane for 3 minutes on the rocking platform on a medium speed setting.

さらに50ミリリットルの洗浄バッファー を加え、ロッキングプラットフォーム上で中速で3分間メンブレンを洗浄する。

10ミリリットルの基質を加える。

Incubate the membrane with the substrate for 10 to 30 minutes with either manual shaking or on a rocking platform.

メンブレンを基質とともに10～30分間、手動で振とうするか、ロッキングプラットフォーム上でインキュベートする。

Once the colors have developed, rinse the membrane twice with distilled water and blot dry with a paper towel.

発色したら、メンブレンを蒸留水で2回すすぎ、ペーパータオルで水分を拭き取る。

Air dry for 3 to 60 minutes and then cover in plastic wrap for storage.

3～60分自然乾燥させ、ラップをかけて保存する。