into a solid membrane or blot.

フィールドはポジティブに向かって負のタンパク質を除去するために充電され 電極。 転送が濡れていたり、半乾燥条件下で発生する可能性があります。ここでは、デモンストレーションを行います

This is based upon the same principal as the previous step in which an electric

従来の湿式転写法。そのカセットからゲルを取り除くことから始め 井戸を含む上部を切断。 指示されたゲルの向き左上隅をノッチ。

field is charged to remove the negative proteins towards a positive

転送サンドイッチを準備しながら転写バッファーでゲルをフロートさせます。 転送サンドイッチを作るためには、カセットが必要になります

electrode.

スポンジ、ろ紙、 ゲル ゲルとPVDFのいずれかのあなたの選択 またはnitrocellulous膜。 PVDFは最初にエタノールに膜を浸漬することによって、アクティブにする必要があります

Transfer can occur under wet or semi-dry conditions. Here we will demonstrate the

2分。 しかし、このPVDFまたはnitrocellulousの選択以外の 膜は、個人的な好みです。 ブロットの方向を示すために、左上隅にノッチ

traditional wet transfer method. Start by removing the gel from its cassette

そして10分間転写バッファーでメンブレンをインキュベートする。 黒から以下のコンポーネントを配置することによってスタックを作成

cutting the top portion containing the wells.

赤のプラス極に負極： スポンジ、 ろ紙、ゲル、 メンブレン。 （素手でゲルやメンブレンに触れないように注意してくださいと

Notch the top left corner to indicated gel orientation.

代わりにきれいなピンセットやヘラを使用しています。 どの段階で膜に触れると、ブロットを汚染する可能性があります

Float the gel in transfer buffer while preparing the transfer sandwich.

過剰なバックグラウンド信号。） ろ紙 とスポンジ。 優しくする可能性のある泡をロールアウトする各レイヤでクリーンローラーを使用して

To make the transfer sandwich you will need a cassette,

気泡が効率的なタンパク質転移を阻害するので、紹介します。 カセットをロックし、風邪を含む装置に置き

sponge, filter paper,

転送バッファ カセットが正しくマイナスからプラスに配置されることを保証する。 熱の蓄積を防止するためには、寒さで転送するために有益である

the gel

装置内に配置またはスピナーバーで冷たいお部屋でパック チャンバーの底。 チャンバーを閉じて、電源に接続します。

gel and your choice of either PVDF

あるメーカーの指示に従って転送を実行 三〇から一二〇分間、通常100ボルト。

or nitrocellulous membrane.

PVDF must first be activated by soaking the membrane in ethanol for

two minutes.

But other than this the PVDF or choice of nitrocellulous

membrane is a personal preference.

Notch the top left corner to indicate blot orientation

and incubate membranes in transfer buffer for 10 minutes.

Create a stack by placing the following components from the black

negative cathode to red positive anode:

sponge,

filter paper, gel,

membrane.

(Be careful not to touch the gel or membrane with your bare hands and

use clean tweezers or spatula instead.

Touching the membrane during any phase can contaminate the blot and lead to

excessive background signal.)

filter paper

and sponge.

Use a clean roller with each layer to gently roll out any bubbles that may be

present since bubbles will inhibit efficient protein transfer.

Lock the cassette and place it in the apparatus containing cold

transfer buffer

ensuring that the cassette is properly positioned from negative to positive.

In order to prevent heat buildup, it is beneficial to transfer with a cold

pack in the apparatus or in a cold room with the spinner bar placed at the

bottom of the chamber.

Close the chamber and connect to a power supply.

Perform the transfer according to the manufacturer's instructions which is

normally 100 volts for thirty to one hundred and twenty minutes.