most sensitive and most inexpensive detection method the

電気化学発光（またはECL）反応。 この方法では、複合体中の酵素を利用

electrochemiluminescence (or ECL) reaction.

これは、二次的に結合させた ECL反応を触媒と光を生成する。 次に、光はX線フィルム上に集め、使用して開発またはデジタル化され

This method utilizes the HRP enzyme,

このアプリケーションのための十分な感度特化したカメラの援助。 私たちは、一対一の比率で等分にECL試薬を混合することにより開始

which was conjugated to the secondary

メーカーの指示に従って。 我々は動揺することなく、3〜5分間メンブレンをインキュベートします。 インキュベーション後、デカントのECL混合物と過剰を拭き取るワイプ実験室を使用する

to catalyze the ECL reaction and produce light.

ソリューション 膜の隅から。 このようにシートプロテクターとして透明なプラスチックのラップで膜を置きます 乾燥を防ぐことができます。 膜が完全に乾燥させることは避けてください。

A light is then gathered onto x-ray film and developed or digitized with the

私たちは、今どんな気泡や余分なソリューションを押し出すためにローラーを使用することができます。 直ちに膜を開発。 フィルムとカメラの両方のシステムでは、手動で露出時間を調整することができます

aid of a specialized camera sensitive enough for this application.

画像完璧なウエスタンブロットを確保するためである。相対バンド密度缶 現在、市販のソフトウェアを用いて定量することができます。

We start by mixing equal parts ECL reagents in a one-to-one ratio

適切な分子量はまた、バンドのサイズを比較することによって確認できます 分子量のはしご。

according to the manufacturer's instructions.

We will incubate the membrane for 3-5 minutes without agitation.

After incubation, decant ECL mixture and use a laboratory wipe to wipe off excess

solution

from the corner of the membrane.

Place the membrane in a clear plastic wrap such as a sheet protector to

prevent drying.

Avoid letting the membrane completely dry out.

We can now use a roller to push out any bubbles or any excess solution.

Immediately develop the membrane.

Both film and camera systems allow you to manually adjust the exposure time

in order to ensure a picture perfect Western Blot. Relative band densities can

now be quantified with commercially available software.

Proper molecular weight can also be verified by comparing band sizes to the

molecular weight ladder.